黄酮检测

行业标准《葛根中黄酮类化合物的测定 高效液相色谱-串联质谱法》，主管部门为农业农村部。本文件规定了葛根中黄酮类化合物的高效液相色谱-串联质谱的定量检测方法。本文件适用于野葛和粉葛中葛根素、3’羟基葛根素、3’甲氧基葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木素、染料木苷、刺芒柄花苷、刺芒柄花黄素、异甘草素和鹰嘴豆芽素A等11种黄酮类化合物含量的测定。

地方标准《槐米及其制品中总黄酮含量的测定 分光光度法》由安徽省浓香型白酒标准化技术委员会归口上报，主管部门为安徽省质量技术监督局。

本文件规定了枸杞叶及枸杞茶中总黄酮含量的分光光度计测定方法。本文件适用于枸杞叶及枸杞茶中总黄酮含量的测定。

地方标准《梧桐花黄酮的提取及其生物活性评价技术规范》，主管部门为山东省市场监督管理局。

行业标准《植物源性食品中10种黄酮类化合物的测定 高效液相色语-串联质谱法》由农产品质量安全监管司/农业农村部农产品营养标准专家委员会归口上报，主管部门为农业农村部。

本文件规定了蜂胶类保健食品总黄酮含量的测定方法。本文件适用于蜂胶类保健食品中总黄酮含量的测定，其中，固体样品和黏稠样品适用范围为0.13～12.7g/100g，液体样品适用范围为0.013～1.27g/100mL。

本文件规定了游离态麦黄酮、总麦黄酮、高麦黄酮小麦的术语、定义和游离态麦黄酮含量、总麦黄酮含量指标及其检测方法本文件适用于小麦籽粒中游离态麦黄酮及总麦黄酮含量的定量测定企业在制定企业标准时可参照使用，相关机构在选育、审定和应用高黄酮小麦及其制品时可参照使用3.1游离态麦黄酮Tricin游离态麦黄酮，又称麦黄酮、苜蓿素、小麦黄素，化学名称为5,7,4’-三羟基-3’,5’-二甲氧基黄酮。游离态麦黄酮具有较强的抗氧化能力，能够调节心血管功能，抑制癌细胞生长，延迟自发性乳腺肿瘤的发生。3.2总麦黄酮Totalwheatflavonoid总麦黄酮，即小麦中黄酮类物质的总含量。黄酮类物质属多酚类化合物，是两个苯环通过三个碳原子相互连接而成的一系列化合物的总称，包含游离态麦黄酮、黄酮苷元及糖苷衍生物。黄酮类物质具有很强的抗氧化和清除自由基的能力，同时具有改善心血管疾病症状、抗癌抗肿瘤、抗菌抗炎、增强人体免疫力等多重功效。3.3高麦黄酮小麦Highflavonoidwheat在小麦生长发育过程中，籽粒中自然产生和积累的游离态麦黄酮含量大于0.5mg/kg（含）或者总麦黄酮含量大于1mg/kg（含）的小麦品种（不含黑、紫、蓝等彩色小麦）。4检测方法4.1小麦籽粒中麦黄酮含量的测定方法高效液相色谱-串联质谱法4.1.1原理　试样用80%乙醇溶液提取，经离心浓缩后复溶，用液相色谱串联质谱仪检测，外标法定量。4.1.2试剂　除另有规定外，水应符合GB/T6682中规定的一级水。4.1.2.1乙醇(CH3CH2OH，CAS号：64-17-5)：色谱纯。4.1.2.2甲醇(CH3OH，CAS号：67-56-1)：色谱纯。4.1.2.3甲酸(HCOOH，CAS号：64-18-6)：色谱纯。4.1.2.4标准品(麦黄酮，Tricin，520-32-1)：纯度≥95.0％。4.1.3溶液配制4.1.3.180%乙醇溶液：取800mL乙醇，加入200mL水，摇匀备用。4.1.3.20.1%甲酸溶液：取1000mL水，加入1mL甲酸，摇匀备用。4.1.4标准溶液配制4.1.4.1标准储备溶液　分别称取5mg标准物质于10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，标准溶液避光-40℃保存，保存期为一年。4.1.4.2材料微孔过滤膜（尼龙）：0.22μm。4.1.5仪器和设备4.1.5.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源(ESI)。4.1.5.2离心管：2mL。4.1.5.3分析天平：感量0.1mg。4.1.5.4移液器：1mL。4.1.5.5震动球磨仪。4.1.5.6样品瓶：2mL，带聚四氟乙烯旋盖。4.1.5.7涡旋混合器。4.1.5.8氮气吹干仪。4.1.5.9高速离心机：13000r/min。4.1.5.10超声波清洗仪。

本标准规定了沙棘黄酮的要求、检验方法、检验规则、包装、运输、贮存和保质期本标准适用于以沙棘果肉为原料，经食用酒精提取加工而成的沙棘黄酮1总则2规范性引用文件3术语和定义4沙棘黄酮的感观要求（色泽形态、组织状态）5沙棘黄酮主要技术指标确定（沙棘总黄酮含量）6沙棘黄酮梨花指标及确定（水分、灰分）7沙棘黄酮主要卫生指标确定（砷、铅、铜、菌落总数、大肠菌群、霉菌、酵母菌、致病菌）8沙棘黄酮包装、检验规则的确定9沙棘黄酮贮运规范的确定。

本文件规定了张家界莓茶总黄酮检测的原理、仪器和用具、试剂与溶液、操作方法及结果计算的方法本文件适用于张家界市莓茶协会成员生产的莓茶的总黄酮测定3　术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1张家界莓茶ZhangjiajieAmpelopsisgrossedentata特指生长于张家界行政区域内，经人工栽培种植的显齿蛇葡萄植物，采摘其幼嫩茎叶或成熟绿叶为原料，采用摊青、杀青、揉捻、析晶、干燥等工艺加工而成的代用茶饮品。3.2总黄酮Totalflavonoids指一类具有苯并芘喃环结构的黄酮类化合物的总称，广泛存在于植物界，最常见的是黄酮和黄酮醇，其它包括双氢黄(醇)、异黄酮、双黄酮、黄烷醇、查尔酮、橙酮、花色苷及新黄酮类等。显齿蛇葡萄叶中的黄酮类化合物主要为二氢杨梅素。4　原理黄酮类化合物中的3-羟基、4-羟基或5-羟基、4-羰基或邻二位酚羟基，可与铝盐进行络合反应，在碱性液体中生成红色络合物，在一定的浓度范围内，其浓度与吸光度符合比耳定律。显齿蛇葡萄叶中的主要活性成分为黄酮类化合物中的二氢杨梅素,最大紫外吸收波长为291nm，可通过制作标准工作曲线和测定样品的吸光度，计算样品中总黄酮含量。5　仪器和用具5.1仪器紫外可见分光光度计（波长范围190nm～900nm，日本岛津公司）、天平（感量0.001g，梅特勒-托利多仪器上海有限公司）、水浴锅（上海精宏实验设备有限公司）、粉碎机（浙江屹立工贸有限公司）。5.2用具容量瓶（10mL,25mL,50mL和100mL）、10mm比色皿。6　试剂与溶液6.1除非另有说明，本文件所用的试剂均为分析纯（AR），水为蒸馏水。6.25%AlCl3溶液：准确称取5.0g无水AlCl3，加入蒸馏水溶解并定容至100mL。6.395%甲醇溶液：量取95mL无水甲醇，向其中加入5mL水，混合均匀。6.4二氢杨梅素（上海阿拉丁生化科技股份有限公司）：纯度≥99.0%（HPLC法），4℃密封避光保存。6.5二氢杨梅素标准品储备液：称取二氢杨梅素标准品15.00mg，加入95%甲醇溶解并定容至25mL。7　操作方法7.1供试样品的制备参照GB/T8303中6.2规定的方法，称取100g左右的显齿蛇葡萄代用茶产品，粉碎成0.85mm（20目）左右的茶粉，混合均匀，每个样品准备三个平行样。7.2测定步骤7.2.1标准曲线的制作分别吸取0.00mL、0.05mL、0.10mL、0.15mL、0.20mL、0.25mL和0.30mL二氢杨梅素标准品储备液置于10mL容量瓶中，加入5%AlCl3溶液3mL，95%甲醇定容至10mL，摇匀后室温避光放置40min，95%甲醇溶液随行空白（即3mL5%AlCl3溶液+7mL95%甲醇），于291nm处测定吸光度。所测吸光度与对应的二氢杨梅素浓度绘制成标准工作曲线（如图1所示）。7.2.2试样母液的制备从7.1中制备的莓茶茶粉中，称取三份样品，每份1.0g，加入100mL95%甲醇，于80℃加热回流提取1h（从甲醇沸腾开始计算时间），得醇提取液，冷却后过滤，将滤液移至100mL容量瓶中，并用95%甲醇溶液定容至100mL。7.2.3试样工作液的制备吸取试样母液2.0mL置于50mL容量瓶中，用95%甲醇定容。7.2.4测定吸取0.5mL试样工作液于10mL容量瓶中，加入3mL5%AlCl3溶液后，用95%甲醇定容至10mL，摇匀，室温避光放置40min，试剂空白液（3mLAlCl3溶液+7mL95%甲醇）作参比，于291nm处测定吸光度。8　结果计算8.1计算方法按照本文件7.2.1的方法制作标准曲线并得到标准曲线方程后，将测定样品的吸光值（Y）代入标准曲线方程中，计算稀释后样品母液中总黄酮的含量（以二氢杨梅素计）/（mg/mL），最终乘以样品稀释倍数50000倍，得到待测定样品中总黄酮含量（以二氢杨梅素计）/（mg/g）。8.2重复性在重复条件下同一样品获得的测定结果的绝对值差值不得超过算术平均值的10%。

本文件规定了葡萄酒中黄酮醇类物质含量的高效液相色谱测定方法。本文件适用于葡萄酒中黄酮醇类物质：芦丁、异槲皮苷、槲皮苷、白藜芦醇、槲皮素、木犀草素、芹菜素、山奈酚含量的测定。本文件的方法检出限：芦丁、异槲皮苷、木犀草素的检出限均为0.0600mg/L，槲皮苷、白藜芦醇、芹菜素、山奈酚的检出限均为0.0450mg/L，槲皮素的检出限0.0300mg/L。