北检（北京）检测技术研究院

本文件描述了牛奶中褪黑素含量测定的液相色谱-串联质谱法

本文件适用于生牛乳、巴氏杀菌乳、灭菌乳中褪黑素的测定

本文件中褪黑素的检出限为0.01μg/L，定量限为0.05μg/L

主要技术变化如下：a）更改了检出限和定量限（见第1章，2021年版的第1章）。b）更改了原理中的定量方法（见第4章，2021年版的第4章）。c）增加了甲醇水溶液（2%）、褪黑素标准中间液Ⅰ、褪黑素标准中间液Ⅱ、氘代褪黑素标准品、氘代褪黑素标准工作溶液和HLB（亲水/油平衡）固相萃取柱、增加了标准曲线1μg/L和2μg/L两个浓度、删除了0.02μg/L浓度（见第5章，2021年版的第5章）。d）增加了氮吹仪，删除了移液管（见第6章，2021年版的第6章）。e）增加了净化步骤（见8.3，2021年版的8.2）。f）增加了氘代褪黑素定量离子对（见8.4.2，2021年版的8.4）。g）更改了定量中标准曲线的制备（见8.4.4，2021年版的8.3）。h）更改了试验数据处理（见第9章，2021年版的第9章）。

本文件描述了血清中褪黑素含量测定的液相色谱-串联质谱法

本文件适用于血清中褪黑素的测定

本文件检测方法的检出限为0.01μg/L，定量限为0.05μg/L

本标准描述了血清中褪黑素含量测定的液相色谱-串联质谱法，适用于血清中褪黑素的测定。提取方式：准确移取1mL试样置于15mL离心管中，加入氘代褪黑素标准工作液50μL，加入4mL甲醇，使用旋涡混合仪振荡提取5min。使用低温高速离心机以10000g、4℃离心5min。取上清液，过0.22μm滤膜，供液相色谱-串联质谱测定。技术要点1：甲醇作为褪黑素溶剂，不但不会影响样品中目标物质的稳定性，还可以使得血清中蛋白变性沉淀，实验操作简便，其回收率能达到60%以上，能够很好满足血清中褪黑素检测要求。技术要点2：血清中的褪黑素用甲醇提取后，用液相色谱-串联质谱仪测定，内标法定量。本标准中规定了褪黑素的检出限为0.01μg/L，定量限为0.05μg/L；本标准方法的褪黑素回收率为：60~120%，依据GB/T?27404符合在一定浓度水平的回收率范围；相对偏差（RSD）≤20%。

本文件规定了牛奶中褪黑素含量的液相色谱-串联质谱测定方法本文件适用于生乳、巴氏杀菌乳、灭菌乳中褪黑素的测定本文件检测方法的检出限为0.04μg/L，定量限为0.10μg/L本标准规定牛奶中褪黑素含量的测定液相色谱-串联质谱法，适用于生乳、巴氏杀菌乳、灭菌乳中褪黑素含量的测定。提取方式：取适量样品置于超声波清洗机，37℃超声30min,使样品充分混匀。准确移取1mL试样置于15mL离心管中，准确加入4mL甲醇，使用旋涡混合仪振荡提取10min，-18℃静置30min。使用低温高速离心机以10000g、4℃离心5min，上清液过0.22μm有机相滤膜过滤至样品瓶，获得试样溶液，供液相色谱-串联质谱测定。技术要点1：甲醇作为褪黑素溶剂，不但不会影响样品中目标物质的稳定性，还可以使得牛奶中蛋白变性沉淀。将待测样品和甲醇采用1:4混合，使用甲醇溶剂一步萃取法，无需净化，减少除脂过程造成的损失。技术要点2：牛奶及其奶制品中含有大量粒度大小不等的脂肪球，超声波（30min）在液体中能产生空化作用，击碎牛奶中的脂肪球。旋涡混合仪振荡提取10min，可以离心得到上机液，不损失褪黑素。技术要点3：牛奶中的褪黑素用甲醇提取后，用液相色谱-串联质谱仪测定，基质匹配外标法定量。本标准中规定了褪黑素的检出限为0.04μg/L，定量限为0.10μg/L；本标准方法的褪黑素回收率为：60~120%，依据GB/T27404符合在一定浓度水平的回收率范围；相对偏差（RSD）≤20%。

国家标准《保健食品中褪黑素含量的测定》由TC466（全国特殊食品标准化技术委员会）归口上报及执行，主管部门为特殊食品司。