北检（北京）检测技术研究院

行业标准《木瓜、菠萝蛋白酶活性的测定 紫外分光光度法》，主管部门为农业农村部。本文件规定了木瓜、菠萝蛋白酶活性测定的紫外分光光度法。本文件适用于木瓜、菠萝蛋白酶活性的测定。

地方标准《饲料添加剂6位点植酸酶活性的测定 分光光度法》，主管部门为山东省质量技术监督局。

本文件规定了用分光光度法测定乙酰胆碱酯酶活性的方法

本文件适用于有机磷与氨基甲酸酯类农药残留检测专用试剂中乙酰胆碱酯酶活性的测定，本方法定量限为0.01μmol/(mL·min)，测量范围为0.01μmol/(mL·min)~0.13μmol/(mL·min)

本文件规定了用分光光度法测定乙酰胆碱酯酶活性的方法。本文件适用于有机磷与氨基甲酸酯类农药残留检测专用试剂中乙酰胆碱酯酶活性的测定，本方法定量限为0.01μmol/(mL·min)，测量范围为0.01μmol/(mL·min)~0.13μmol/(mL·min)。

乙酰胆碱酯酶能水解碘化硫代乙酰胆碱生成硫代胆碱和乙酸。硫代胆碱与巯基显色剂5,5'-二硫代双（2-硝基苯甲酸）（DTNB）反应生成黄色化合物5-巯基-2-硝基苯甲酸（TNB），TNB在波长412nm处有特征性光吸收，测定其吸光度值；根据还原型谷胱甘肽制备标准溶液与DTNB反应，所绘制谷胱甘肽的量与吸光度关系的标准曲线，计算出乙酰胆碱酯酶的酶活性值。

地方标准《食用菌纤维素酶、木聚糖酶、漆酶、蛋白酶活性检测技术规程》，主管部门为河南省质量技术监督局。

国家标准《超氧化物歧化酶活性检测方法》由SWG11（全国工具酶标准化工作组）归口，主管部门为国家标准化管理委员会。

本文件描述了超氧化物歧化酶活性检测方法的原理、试剂或材料、仪器设备、样品制备、试验步骤、结果计算和质量控制。本文件适用于超氧化物歧化酶活性的检测。

国家标准《肠激酶活性检测方法》由SWG11（全国工具酶标准化工作组）归口，主管部门为国家标准化管理委员会。

本文件描述了肠激酶活性检测方法的试剂或材料、仪器设备、试验步骤、结果计算和质量控制。本文件适用于肠激酶活性的检测。

国家标准《谷物和谷物产品α-淀粉酶活性的测定 比色法》由TC270（全国粮油标准化技术委员会）归口，主管部门为国家粮食和物资储备局。

行业标准《出口粮食、饲料检验 第4部分：尿素酶活性测定方法》由国家认证认可监督管理委员会归口上报，主管部门为国家质量监督检验检疫总局。

本文件规定了乳中乳过氧化物酶活性测定的比色法。本文件适用于生乳、巴氏杀菌乳中乳过氧化物酶活性的测定。

行业标准《临床酶活性浓度测定方法总则》，主管部门为卫生部。

国家标准《饲用植酸酶活性的测定 分光光度法》由TC76（全国饲料工业标准化技术委员会）归口上报及执行，主管部门为国家标准化管理委员会。

国家标准《大豆制品中尿素酶活性测定方法》由TC64（全国食品工业标准化技术委员会）归口上报及执行，主管部门为国家标准化管理委员会。

1.范围2.原理3.仪器4.试剂5实验方法6.结果计算7.试验有效性验证8.结果报告

本文件规定了一种体外酪氨酸酶活性抑制试验方法本文件适用于通过抑制酪氨酸酶活性而达到美白效果的化妆品水溶性原料的功效测试1.实验方法除非另有说明，本文件所提到的受试样品的浓度均指其配制时的浓度。1.1受试物处理阳性对照曲酸用PBS缓冲液稀释成：0.080g/L、0.040g/L、0.020g/L、0.010g/L、0.008g/L、0.005g/L、0.002g/L、0.001g/L系列质量浓度梯度溶液。受试物处理：受试物用PBS缓冲液梯度稀释成5个以上合适质量浓度的样品溶液。1.2试验分组在96孔酶标板中设置溶剂本底孔（Ta）、溶剂反应孔（Tb）、样品本底孔（Tc）、样品反应孔（Td）。其中，Ta组为溶剂本底组，不加底物L-酪氨酸溶液、不加样品溶液；Tb组为溶剂反应组，加底物L-酪氨酸溶液但不加样品溶液；Tc组为样品本底组，不加底物L-酪氨酸溶液、加样品溶液；Td组为样品反应组，既加底物L-酪氨酸溶液又加样品溶液。每组做三个复孔。1.3试验步骤参照表1试剂添加量，在各孔依次加入L-酪氨酸溶液、样品溶液/溶剂、PBS缓冲液，充分混匀，置于37℃恒温环境下孵育10min后依次在各孔加入20μL的酪氨酸酶溶液，37℃混匀反应5min±5s后即刻放入酶标仪，在475nm波长处进行测定。注：各孔从加入酪氨酸酶溶液到测定吸光度，保持时间一致（5min±5s）。2.结果计算2.1酪氨酸酶活性抑制率2.2半数抑制浓度（IC50值）以受试样品的浓度为横坐标，其对应的酪氨酸酶抑制率为纵坐标，绘制曲线图，拟合得到回归方程（R2≥0.9）。根据回归方程，计算酪氨酸酶抑制率为50%时对应的样品浓度，即为该受试样品的IC50值，同时计算其95%置信区间。2.3曲酸当量值3.试验有效性验证每批次实验都需要加入阳性对照的测试，阳性对照曲酸的IC50应在0.005g/L～0.03g/L，则认为试验系统有效。各组平行孔间的抑制率间的标准差（StandardDeviation，SD）值需≤15%，则认为试验平行性有效。加入酪氨酸酶溶液，37℃混匀反应5min±5s后即刻放入酶标仪，在475nm波长处进行测定：±5s时间对测试结果IC50的影响，标准差SD值≤3%。4.结果判定样品在某一受试浓度下的酪氨酸酶抑制率应表述为：抑制率平均值±抑制率间的标准差（SD）。进行不同样品的酪氨酸酶抑制能力比较，在同一受试浓度下，抑制率越大代表该样品的酪氨酸酶抑制能力越强。进行不同样品的酪氨酸酶抑制能力比较，IC50值越小代表该样品的酪氨酸酶抑制能力越强。进行不同样品的酪氨酸酶抑制能力比较，曲酸当量值越小代表该样品的酪氨酸酶抑制能力越强。